Elektroforeza, kaj je, čemu služi in kako to počne
Elektroforeza je laboratorijska tehnika, ki se izvaja z namenom ločevanja molekul glede na njihovo velikost in električni naboj, tako da je mogoče postaviti diagnozo bolezni, preveriti ekspresijo beljakovin ali prepoznati mikroorganizme.
Elektroforeza je preprost in poceni postopek, ki se uporablja v laboratorijskih rutinah in v raziskovalnih projektih. Glede na namen elektroforeze bo morda treba opraviti še druge teste in preglede, da dobimo diagnozo, na primer.
Za kaj gre
Elektroforeza se lahko izvaja v različne namene, tako v raziskovalnih projektih kot pri diagnozi, saj gre za preprosto in poceni tehniko. Tako se elektroforeza lahko izvede za:
- Prepoznati viruse, glive, bakterije in parazite, pri čemer je ta aplikacija pogostejša pri raziskovalnih projektih;
- Preizkus očetovstva;
- Preverite izražanje beljakovin;
- Prepoznati mutacije, ki so na primer uporabne pri diagnozi levkemije;
- Analizirajte vrste krožečega hemoglobina, ki so uporabni pri diagnozi srpastecelične anemije;
- Ocenite količino beljakovin v krvi.
Glede na namen elektroforeze bo morda treba opraviti še druge dopolnilne teste, da bo zdravnik dokončno postavil diagnozo.
Kako se to počne
Za elektroforezo je potreben gel, ki je lahko poliakrilamid ali agaroza, odvisno od cilja, pufer za elektroforezo in kad, molekul za molekulsko maso in fluorescenčno barvilo, poleg opreme za UV ali LED svetlobo, imenovane tudi transilluminator.
Po pripravi gela je treba postaviti določen predmet, tako da so v gelu narejeni vdolbinice, ki jih popularno imenujemo glavnik, in pustite, da se gel nastavi. Ko je gel pripravljen, samo nanesite snovi v vdolbinice. Za to je treba v eno vdolbinico postaviti marker molekulske mase, pozitivno kontrolo, to je snov, za katero je znano, kaj je, negativno kontrolo, ki zagotavlja veljavnost reakcije, in vzorce, ki jih je treba analizirati. Vse vzorce je treba mešati s fluorescenčnim barvilom, saj je na ta način mogoče vizualno prikazati trakove na transilluminatorju.
Gel z vzorci je treba postaviti v kad za elektroforezo, ki vsebuje specifično pufersko raztopino, nato pa se naprava vklopi, da pride do električnega toka in posledično do potencialne razlike, kar je pomembno za ločitev delci glede na njihovo obremenitev in velikost. Elektroforetski čas teka se razlikuje glede na cilj postopka in lahko traja do 1 ure.
Po določenem času je mogoče videti rezultat elektroforetskega teka skozi transilluminator. Ko je gel postavljen pod UV ali LED svetlobo, je mogoče vizualizirati vzorec vezanja: večja je molekula, manjša je njena migracija, bližje se vdolbinici, medtem ko je močnejša molekula, večji je migracijski potencial.
Za potrditev reakcije je potrebno vizualizirati pasove pozitivne kontrole in v negativnem nadzoru nič ne vizualizirati, ker sicer to pomeni, da je prišlo do kontaminacije, celoten postopek pa je treba ponoviti.
Vrste elektroforeze
Elektroforeza se lahko izvaja za različne namene in glede na njen cilj je mogoče uporabiti več vrst gela, najpogostejši sta poliakrilamid in agaroza..
Elektroforeza za identifikacijo mikroorganizmov se pogosteje izvaja v raziskovalnih laboratorijih, vendar se lahko v diagnostične namene elektroforeza uporablja za prepoznavanje hematoloških bolezni in bolezni, ki se razvijajo s povečanjem količine beljakovin in so glavne vrste elektroforeze. :
1. Elektroforeza hemoglobina
Elektroforeza hemoglobina je laboratorijska tehnika, ki se izvaja za prepoznavanje različnih vrst hemoglobina, ki kroži v krvi, kar omogoča ugotavljanje prisotnosti bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina. Vrsta hemoglobina se identificira z elektroforezo pri točno določenem pH, idealno med 8,0 in 9,0, pri čemer se preveri vzorec pasov, ki ga je mogoče primerjati z običajnim vzorcem, kar omogoča ugotavljanje prisotnosti nenormalnih hemoglobinov.
Za kaj je narejeno: Elektroforeza hemoglobina se izvaja za raziskovanje in diagnosticiranje bolezni, povezanih s sintezo hemoglobina, kot sta srpastecelična anemija in bolezen hemoglobina C, poleg tega, da je koristna pri diferenciaciji talasemije. Naučite se, kako razlagati elektroforezo hemoglobina.
2. Proteina elektroforeza
Proteinska elektroforeza je izpit, ki ga zahteva zdravnik, da oceni količino beljakovin, ki krožijo v krvi, in tako ugotovi bolezni. Ta test se opravi iz vzorca krvi, ki ga centrifugiramo, da dobimo plazmo, del krvi, ki je med drugimi snovmi sestavljen iz beljakovin.
Po elektroforezi je mogoče prikazati vzorec pasov in posledično graf, v katerem je navedena količina vsake frakcije beljakovin, ki je temeljna za diagnozo.
Za kaj je narejeno: Elektroforeza z beljakovinami omogoča zdravniku, da razišče pojavnost multiplaga mieloma, dehidracije, ciroze, vnetja, jetrnih bolezni, pankreatitisa, lupusa in hipertenzije po vzorcu pasu in grafu, predstavljenem v poročilu o pregledu.
Razumeti, kako se to počne in kako razumeti rezultat elektroforeze beljakovin.
